顯微課堂 | 走進(jìn)低溫共聚焦顯微鏡 STELLARIS Cryo

STELLARIS Cryo是一款共聚焦顯微鏡系統(tǒng)，旨在幫助您定位感興趣的區(qū)域，以便進(jìn)行原位冷凍電鏡。STELLARIS Cryo為您提供可靠的目標(biāo)定位精準(zhǔn)度，同時(shí)還能提供您可以信賴的性能，并提高實(shí)驗(yàn)樣本的安全性。

為您鎖定冷凍電子斷層掃描

工作流程中的關(guān)鍵目標(biāo)

以3D方式解析并識(shí)別細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)

對(duì)于相關(guān)工作流程，至關(guān)重要的是獲取低溫顯微鏡下識(shí)別的確切靶點(diǎn)坐標(biāo)，因?yàn)闊晒庑盘?hào)在隨后的電子顯微鏡步驟中不可見。

我們的LAS X Coral Cryo軟件能夠在納米尺度上精準(zhǔn)定位開放格式的坐標(biāo)標(biāo)記。不同的標(biāo)記類型提供不同的功能，還可用于地標(biāo)、薄片和熒光小體標(biāo)記。配備LAS X Coral Cryo軟件的STELLARIS Cryo顯微鏡以開放文件格式提供3D共聚焦數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)可以導(dǎo)入到任何電子顯微鏡軟件：TIFF、LIFE、ome.tiff。

LAS X Coral Cryo：基于插值的3D目標(biāo)定位，沿著x軸和y軸對(duì)切片進(jìn)行多層掃描(z-stack)。可以在所有相關(guān)窗口中交互式地移動(dòng)標(biāo)記。

減少STELLARIS Cryo 冷凍共聚焦與cryo-FIB之間的處理步驟。

我們提供專用的Coral Cryo冷凍電子斷層掃描工作流程，可確保樣本活性、進(jìn)行質(zhì)量檢查，重要的是確保3D成像精準(zhǔn)可靠。

STELLARIS Cryo包含冷臺(tái)和傳送梭，旨在與LAS X Coral Cryo軟件配合使用，并提供適用于冷凍聚焦離子束(FIB)或真空冷凍傳輸(VCT500)載物臺(tái)的各種無縫集成和傳送選項(xiàng)。新的冷臺(tái)擴(kuò)大了非冷凍應(yīng)用中的工作范圍，從而提升了STELLARIS共聚焦成像的可用性。

由于所有組件均兼容，您可以在樣本傳送過程中保持樣本安全。

Coral Cryo 3D冷凍電子斷層掃描工作流程解決方案

新一代STELLARIS

觀察每個(gè)樣本中更微小的細(xì)節(jié)，捕捉更微弱的信號(hào)，并在整個(gè)光譜范圍內(nèi)收集更精確、更可靠的數(shù)據(jù)。

利用基于熒光壽命的信息，在實(shí)驗(yàn)中增加一個(gè)額外的維度，有助于獲得突破性的發(fā)現(xiàn)。

簡化了設(shè)置和導(dǎo)航，可提高工作效率。

透明化處理的擬南芥根樣本的平均到達(dá)時(shí)間圖像(TauContrast)。樣本來源：美國加利福尼亞州拉荷亞索爾克研究所W. Busch。

利用先進(jìn)的成像技術(shù)區(qū)分靶標(biāo)與背景信息

我們的Power HyD檢測器系列、整體優(yōu)化的光路與新一代白激光之間協(xié)同整合，可提供出色的成像性能。即使在對(duì)低豐度標(biāo)記樣品成像時(shí)，您也可以從更明亮的信號(hào)、更高的對(duì)比度和靈敏度中獲得更清楚的成像結(jié)果。

運(yùn)用的LIGHTNING檢測理念，盡可能地從您的玻璃化冷凍樣本中提取信息，獲得對(duì)科學(xué)問題的深入解答。這是一個(gè)自適應(yīng)的信息提取過程，可以呈現(xiàn)圖像信息中的精細(xì)結(jié)構(gòu)和細(xì)節(jié)。

因此，您可以更精準(zhǔn)地定位感興趣的3D結(jié)構(gòu)：在室溫和冷凍條件下，為電鏡顯微成像工作流程的后續(xù)步驟做好準(zhǔn)備。

在電鏡載網(wǎng)上快速冷凍的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。細(xì)胞器染色：Tag BFP（細(xì)胞核，藍(lán)色）、Cerulean（細(xì)胞膜，綠色）、hmAzami-Green（線粒體，橙色）、mCitrine（高爾基體，紅色）、mCherry（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，品紅色）、反射（載網(wǎng)和碳膜層可視化，白色）。樣本來源：德國多特蒙德馬克斯·普朗克分子生理學(xué)研究所 Oleg Sitsel 博士。比例尺xy：10 µm；z：1 µm。

您可以信賴的性能

在冷凍電子顯微鏡中，至關(guān)重要的是在整個(gè)工作流程中監(jiān)測冰層厚度，而且越早檢查和評(píng)估越好。如果冰層太厚，會(huì)在銑削階段造成問題，而如果冰層太薄，又可能會(huì)影響樣本的穩(wěn)定性。

STELLARIS Cryo提供了兩種冰層厚度檢查模式：快速攝像概覽模式和共聚焦反射模式，后者以3D方式確定冰層厚度。

Cryo CLEM物鏡HC PL APO 50x/0.90專為滿足冷凍光學(xué)顯微成像需求而開發(fā)，提供超分辨率優(yōu)勢，同時(shí)又無需浸沒液體。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞顯示Hoechst（藍(lán)色，細(xì)胞核），Mitotracker Green（綠色，線粒體）、Bodipy（紅色，脂滴）、熒光珠（品紅色，1µm），反射（白色）。比例尺10µm：細(xì)胞由德國海德堡歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室Mahamid團(tuán)隊(duì)的Ievgeniia Zagoriy提供

使用基于熒光壽命的信息去除無用信號(hào)

STELLARIS重新定義共聚焦顯微鏡，在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中為您提供額外維度的信息。有了TauSense，基于熒光壽命的性新工具唾手可得。只需點(diǎn)擊幾下，您便可消除無用信號(hào)，展示圖像中的更多細(xì)節(jié)，在單個(gè)實(shí)驗(yàn)中多路復(fù)用更多標(biāo)記，分離具有重疊光譜的熒光團(tuán)，并通過基于熒光壽命的信息來探索局部的功能和微觀環(huán)境的變化。有了TauSense，STELLARIS為您的研究開啟了各種全新的可能性。

使用STELLARIS Cryo中的TauSense，您可以利用熒光壽命可能存在的差異來分離重疊的熒光團(tuán)。TauSense還可用于識(shí)別信號(hào)中的干擾成分，如載網(wǎng)反射。

用TauSense成像工具檢查矽藻。TauSeparation：左圖：組分1刻畫出葉綠體的自發(fā)熒光，光子平均到達(dá)時(shí)間0.1ns。中圖：組分2顯示肌動(dòng)蛋白絲干凈的LifeAct-GFP信號(hào)，平均到達(dá)時(shí)間2.7ns。右圖顯示TauContrast：該查詢表用顏色表示到達(dá)時(shí)間：藍(lán)色表示到達(dá)時(shí)間較短，黃色（趨于紅色）表示到達(dá)時(shí)間較長。樣本由德國德累斯頓工業(yè)大學(xué)B CUBE分子生物工程中心的Nicole Poulsen提供。

在成像期間最大限度減少污染

在整個(gè)冷凍工作流程中，樣本玻璃化后必須立即保持在除濕和冷凍條件下。冷凍顯微成像套件配備冷臺(tái)和傳送梭，可以確保安全、直觀地進(jìn)行樣本裝載和直接傳送，同時(shí)始終將標(biāo)本保持在理想的冷凍條件下。

冷臺(tái)保持氮?dú)鈱?duì)周圍空氣的恒定過壓，使您能夠在穩(wěn)定的冷凍條件下進(jìn)行光學(xué)顯微成像。冷臺(tái)支持進(jìn)行高分辨率3D成像所需的所有移動(dòng)。

為提高裝載過程的安全性，可選擇使用一個(gè)放置傳送梭的環(huán)境保護(hù)罩。該環(huán)境保護(hù)罩可確保在所有條件下安全裝載，從而提供額外的過程控制，并延長安全裝載時(shí)間窗。