電鏡樣品冷凍固定技術(shù)怎么選？一文理清兩大核心技術(shù)

冷凍固定技術(shù)決定了電鏡圖像的真實(shí)性和分辨率

在電子顯微鏡研究中，樣品冷凍固定技術(shù)是決定成像質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。如何在瞬間“定格"生物樣品的原始狀態(tài)，避免冰晶損傷和化學(xué)假象？?jī)纱蠛诵募夹g(shù)各展所長(zhǎng)，本文將為您理清思路。

高壓冷凍技術(shù)（HPF）：厚樣品的黃金標(biāo)準(zhǔn)

原理：

利用2100 bar高壓降低水的冰點(diǎn)，配合液氮噴射實(shí)現(xiàn)12,000°C/s以上的極速降溫，使樣品中的水形成非晶態(tài)冰而非破壞性冰晶。

優(yōu)點(diǎn)：

?可處理200μm厚度的樣品（如動(dòng)植物組織、細(xì)胞團(tuán)）

?保存細(xì)胞器膜結(jié)構(gòu)完整，接近生理狀態(tài)

?毫秒級(jí)捕捉動(dòng)態(tài)過程（需配合光/電刺激模塊）

局限：

?設(shè)備復(fù)雜度高，需專用儀器

?液氮消耗量大（Leica EM ICE約30升/天，比同類型產(chǎn)品型號(hào)節(jié)省70%以上的液氮）

適用樣品：

動(dòng)物組織、植物組織、三維細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)菌、病毒等

投入冷凍技術(shù)（Plunge Freezing）：薄樣品的效率之選

原理：

將樣品載網(wǎng)直接投入-196°C液態(tài)乙烷/丙烷，實(shí)現(xiàn)超高速冷凍。

優(yōu)點(diǎn)：

?操作簡(jiǎn)便快速

?成本低，無需復(fù)雜設(shè)備

?保存表面納米結(jié)構(gòu)

局限：

?僅能處理＜10 μm超薄層樣品

?厚樣品內(nèi)部易形成冰晶

適用樣品：

病毒顆粒、蛋白質(zhì)溶液、脂質(zhì)體、單層細(xì)胞

徠卡顯微系統(tǒng)：全流程冷凍解決方案

針對(duì)不同研究需求，徠卡顯微系統(tǒng)提供專業(yè)級(jí)電鏡冷凍制樣設(shè)備：

Leica EM ICE高壓冷凍儀

整合光/電刺激模塊/活細(xì)胞和冷凍光電關(guān)聯(lián)/冷凍斷裂蝕刻，5種波長(zhǎng)LED實(shí)現(xiàn)毫秒級(jí)動(dòng)態(tài)捕捉，支持連續(xù)處理9個(gè)樣品，日耗液氮僅30升，是神經(jīng)突觸傳遞等細(xì)胞和組織研究的利器。

應(yīng)用案例： Dinoflagellate_plankton

Leica EM GP2投入冷凍儀

自動(dòng)吸除多余液體，溫濕度可控環(huán)境箱（4-60°C，濕度99%），實(shí)現(xiàn)薄液層樣品的一鍵式玻璃化冷凍，操作效率提升50%。

特別的單面濾紙吸附設(shè)計(jì)，可有效保護(hù)樣品不被擠壓，尤其是外泌體、單層細(xì)胞等易被擠壓形變的樣品。

Leica EM GP2

單面濾紙吸附

應(yīng)用案例：細(xì)菌/蛋白/囊泡/微管

Leica EM AFS2冷凍替代儀

專為HPF樣品設(shè)計(jì)，程序化溫控替代流程（如-90°C維持72小時(shí)，連續(xù)可控梯度升溫），搭配自動(dòng)試劑處理系統(tǒng)，消除冰晶重結(jié)晶風(fēng)險(xiǎn)。

Leica EM AFS2

電鏡的世界里，

沒有“差不多"的影像，

只有“恰到好處"的技術(shù)選擇

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從冷凍到成像的全周期護(hù)航